Фиксация (способ препарирования)

В биологии и медицине , особенно в патологии , фиксация относится к сохранению структур гистологических или анатомических объектов с целью дальнейших исследований. Используемые фиксаторы зависят от дальнейшего использования полученного таким образом препарата.

Методы

метод Пример области применения Подробности процедуры
Формальдегид , параформальдегид Обычная гистология и иммуногистология, а также анатомия Замачивание в забуференном растворе формальдегида 40 г / л. Формальдегид действует как денатурант , например Б. с формалином или раствором Буэна .
Криоконсервация Быстрая резка Замораживание при температуре около -30 ° C, например, с сухим льдом
Спирты (например, метанол или этанол ), ацетон или диэтиловый эфир Цитодиагностика Вытеснение внутриклеточной воды и одновременная денатурация замачиванием. Обычно используют водный раствор вытеснителя, концентрацию раствора постепенно увеличивают и в конце используют 100% фиксатор.
Сшивающие агенты, такие как глутаральдегид Просвечивающая электронная микроскопия , дубление Осмий осмий , уранил ацетат или вольфрамофосфорные кислоты являются главным образом используются в качестве контрастных сред .
нагревать микробиология Нагревание препарата в пламени (например, горелки Бунзена ) или с помощью микроволн.
фиксирующие решения, сохраняющие цвет Макроскопическая подготовка Например, решение Jores I, решение Kaiserling I, решение Romhànyische и другие решения.
Соли из тяжелых металлов Гистология, дубление Образование плохо растворимых белковых солей, например Б. при хромовом дублении или при фиксации солями меди по Олланду или солями ртути по Ценкеру

Во время фиксации под микроскопом исследуемый материал фиксируется на стекле предметного стекла . Для этого можно использовать нагревание, при котором органические вещества объекта, такие как белки и полимерные углеводы ( слизь ), изменяются таким образом, что они прилипают к поверхности стекла ( термофиксация ). Действие определенных химикатов, таких как формальдегид , может изменять полимерные компоненты объекта ( например, денатурацию ) таким образом, что они прилипают к поверхности стекла. Когда микроорганизмы размазываются по предметному стеклу, они обычно в значительной степени погибают от фиксации. Только после фиксации, если необходимо, окрашиваются, чтобы выделить структуры объектов, потому что в этом случае объекты уже не могут быть так легко смыты, и поскольку их структуры в этом случае уже не так легко изменить в процессе окраски. Фиксация всегда сопровождается денатурацией, что снижает автолиз . Перед микрошлифом заделывают биологическую ткань после фиксации парафином . это создает структуру FFPE .

Когда целые животные или их части фиксируются инфузией или инъекцией в кровеносные сосуды , также используется перфузия , например Б. в фиксации Тиля . Для фиксации по Уолтеру Тилю используется фиксирующий раствор с борной кислотой , этиленгликолем , нитратом аммония и калия, хлоркрезолом , сульфитом натрия и формальдегидом. Последующее хранение происходит в более разбавленном растворе ( бочковом растворе ).

В иммунологии процесс устранения последствий фиксации называется демаскированием антигена . Сшивание и модификация биомолекул формальдегидом может быть обращена нагреванием или добавлением оснований .

Фиксация в анатомии

В анатомии фиксируется как целое тело, так и отдельные корпуса банок. В макроскопической анатомии , в частности, это возможно с телом доноров. Такие препараты затем используются на курсах подготовки к медицинскому обучению. Первое описание фиксирующих свойств метаналя применительно к макроскопической анатомии (медицина человека) произошло в 1894 г. Ф. Блюмом. Он наблюдал переход ткани из «твердого, мягкого агрегатного состояния в гораздо более стойкую и твердую модификацию». Впервые он заметил это при контакте с собственной кожей и последующем затвердевании эпидермиса . Затем он поместил «мышь сибирской язвы» в формальдегид на одну ночь, а затем обнаружил, что это похоже на спиртосодержащий препарат . Блюм далее описал, что 10-кратное разведение (исходное значение: 40% раствор) затвердевает быстрее, чем этанол, даже при более крупных тканях. Макроскопически ткань сохранилась лучше, чем после обработки этанолом, при этом не наблюдалось значительной усадки. В мозге можно было даже четко различить белое и серое вещество. После обезвоживания и погружения в целлоидиновую микроскопию чувствительность к гистологическому окрашиванию все еще определялась даже через несколько дней. Блюм сотрудничал с Вейгертом, который выполнял действия на головном и спинном мозге , в то время как сам Блюм выполнял обработку других органов. Майстер, Люциус и Брюнинг цу Хёхст а. М. (ныне Sanofi SA ) обратила внимание на продукт «Формол» (название продукта) и передала его Blum для ознакомления. Отец практикующего врача Ф. Блюма, старший преподаватель Я. Блюм, впервые применил формальдегид в 1893 г. для консервирования зоологических и ботанических препаратов. Сегодня формальдегид - наиболее широко используемый фиксатор и консервант. Сегодняшние методы часто по-прежнему основаны на методе формалина, но доступны и другие методы удержания трупа. В частности, подвижные и часто сохраняющие цвет фиксации все больше и больше становятся предметом медицинского образования и обучения из-за их чрезвычайно реалистичной ценности. Наиболее известные решения включают так называемые спиртовые и солевые растворы, а также раствор Тиля .

литература

  • Мария Мулиш, Ульрих Велш (ред.): Микроскопическая техника Romeis. 18-е издание. Издательство Spectrum Academic, Гейдельберг 2010, ISBN 978-3-8274-1676-6 . ( ограниченный предварительный просмотр в поиске Google Книг)
  • Гудрун Ланг: Гистотехнология. Springer-Verlag, 2013, ISBN 978-3-7091-1190-1 . Глава 5: Фиксация.
  • Зигфрид Шверин: анатомические сухие, влажные и костные препараты. Springer-Verlag, 1952, ISBN 978-3-662-30466-2 .
  • Вальтер Ф. Стейнманн: Макроскопические методы подготовки в медицине. Thieme-Verlag, 1982, ISBN 3-13-623901-6 .

Индивидуальные доказательства

  1. ^ A b Mareike Dartsch: вентральный пузырно-уретральный подвесной аппарат как часть мужской системы удержания мочи . Диссертация . Медицинский факультет Лейпцигского университета, 2012 г., с. 35.
  2. ^ Х. Френкель-Конрат, Б.А. Брэндон, Х.С. Олькотт: реакция формальдегида с белками; участие индольных групп; грамицидин. В кн . : Журнал биологической химии. Volume 168, Number 1, April 1947, ISSN  0021-9258 , pp. 99-118. PMID 20291066 .
  3. ↑ Х. Френкель-Конрат, HS Olcott: Реакция формальдегида с белками; сшивание между амино и первичными амидными или гуанидильными группами. В: Журнал Американского химического общества. Том 70, номер 8, август 1948 г., ISSN  0002-7863 , стр. 2673-2684. PMID 18876976 .
  4. ↑ Х. Френкель-Конрат, HS Olcott: Реакция формальдегида с белками; сшивание аминогрупп фенольными, имидазольными или индольными группами. В кн . : Журнал биологической химии. Том 174, номер 3, июль 1948 г., ISSN  0021-9258 , стр. 827-843. PMID 18871242 .
  5. ↑ Ф. Блюм: Примечание об использовании формальдегида (формола) в качестве отвердителя и консерванта. В: Анат. 9, 1894, стр. 229-231.
  6. ↑ Ф. Блюм: Формальдегид как отвердитель. В: Zschr.f. Mikro. и микросхемы. Tech. 10, 1896, стр. 314-315.
  7. ↑ Дж. Блюм: Формол как консервационная жидкость. В: Зоол. Число 10, 1893, с. 450-452.
  8. ↑ Рейнхард Хильдебранд: Формалин. В: Werner E. Gerabek , Bernhard D. Haage, Gundolf Keil , Wolfgang Wegner (ред.): Enzyklopädie Medizingeschichte. Том 1: AG. Вальтер де Грюйтер, Берлин / Нью-Йорк 2007, ISBN 978-3-11-019703-7 , стр. 410.
  9. ↑ С. Хаяси и др.: Метод насыщенного солевого раствора: полезное бальзамирование трупов для обучения хирургическим навыкам. В: Медицина Балтимора. Т. 93, № 27, 2014 г., стр. 196–197. ISSN  0025-7974
  10. ^ Р. Коулман, И. Коган: Улучшенная жидкость для бальзамирования с низким содержанием формальдегида для сохранения трупов для обучения анатомии. В: J. Anat.192, 1998, pp. 443-446.
  11. ↑ Дж. Вайнер: Нитритная отверждающая соль-этанол-полиэтиленгликоль раствор 400 для фиксации и сохранения органов и тел животных для обучения и исследований. В: Таксидермист. Том 57, 2011, стр. 34-53, ISSN  0032-6542
  12. ↑ В. Тиль: Сохранение целых трупов в естественных цветах. В: Ann. Анат.174 , 1992, с. 185-195.